Spectrophotometer UH5300 dari Hitachi High-Tech merupakan instrumen analisis UV-Vis canggih yang memegang peran kritis dalam industri farmasi. Dengan akurasi tinggi (resolusi hingga 0.1 nm) dan stabilitas gelombang (±0.1 nm), alat ini menjadi pilihan utama untuk uji kualitas obat, validasi metode, dan studi stabilitas. Berikut penjelasan mendalam tentang aplikasinya dalam farmasi.
1. Pengukuran Konsentrasi Obat (Contoh: Paracetamol dalam Tablet)
Prinsip Dasar
Paracetamol memiliki puncak absorbansi maksimal pada λ = 243 nm (dalam pelarut air/alkohol). UH5300 mengukur intensitas serapan cahaya UV oleh sampel untuk menghitung konsentrasi menggunakan Hukum Beer-Lambert:A=ϵ⋅c⋅lA=ϵ⋅c⋅l
di mana:
- AA = Absorbansi
- ϵϵ = Koefisien ekstingsi molar (L/mol·cm)
- cc = Konsentrasi (mol/L)
- ll = Panjang kuvet (cm)
Protokol Eksperimen
- Siapkan Larutan Standar:
- Larutkan paracetamol murni dalam methanol untuk membuat seri standar (0.5–20 µg/mL).
- Ukur Absorbansi:
- Gunakan kuvet kuarsa 1 cm.
- Setel UH5300 ke λ = 243 nm.
- Blanko dengan pelarut methanol.
- Buat Kurva Kalibrasi:
- Plot absorbansi vs konsentrasi (R² harus >0.999).
- Analisis Sampel Tablet:
- Gerus tablet, larutkan dalam methanol, saring, dan ukur absorbansi.
Interpretasi Data
- Jika absorbansi sampel = 0.450 dan persamaan kurva y=0.025xy=0.025x:c=Aslope=0.4500.025=18 µg/mLc=slopeA=0.0250.450=18 µg/mL
- Hitung kadar paracetamol/tablet dengan faktor pengenceran.
2. Uji Disolusi (Laju Pelepasan Obat)
Metode
- Alat: Dissolution tester + UH5300 untuk analisis waktu nyata.
- Kondisi: Media disolusi (pH 1.2 atau 6.8), suhu 37±0.5°C, putaran 50 rpm.
- Prosedur:
- Ambil aliquot pada waktu tertentu (5, 10, 15, 30, 60 menit).
- Ukur absorbansi pada λ maks obat.
- Hitung % obat terlarut menggunakan kurva standar.
Contoh Output
| Waktu (menit) | Absorbansi | % Terlarut |
|---|---|---|
| 5 | 0.120 | 15.2% |
| 30 | 0.480 | 78.5% |
Kriteria Penerimaan: >80% obat terlarut dalam 30 menit (USP/BP).
3. Validasi Metode (ICH Q2)
UH5300 mendukung validasi metode dengan parameter:
a. Linearitas
- Prosedur: Ukur 5 konsentrasi standar (50%, 80%, 100%, 120%, 150%).
- Kriteria: R² ≥ 0.998.
b. LOD & LOQ
- Rumus:LOD=3.3×SDblankslope,LOQ=10×SDblankslopeLOD=slope3.3×SDblank,LOQ=slope10×SDblank
- Contoh: LOD paracetamol = 0.1 µg/mL.
c. Presisi (RSD)
- Ukur 6 replikasi sampel 100%:RSD=(SDmean)×100%<2%.RSD=(meanSD)×100%<2%.
4. Studi Stabilitas (Degradasi Obat)
Desain Eksperimen
- Kondisi Stress:
- Thermal: 40°C/75% RH (simulasi penyimpanan).
- Photo: Paparan UV 254 nm (6 jam).
- Analisis:
- Bandingkan spektrum sebelum/sesudah stress.
- Hitung % degradasi dari penurunan absorbansi.
Contoh Hasil
| Kondisi | Absorbansi Awal | Absorbansi Akhir | % Degradasi |
|---|---|---|---|
| Thermal | 0.850 | 0.800 | 5.9% |
| UV Light | 0.850 | 0.720 | 15.3% |
Interpretasi: Jika degradasi >10%, diperlukan pengemasan khusus.
5. Perhitungan % Recovery dan RSD
a. % Recovery
%Recovery=(Konsentrasi TerukurKonsentrasi Teoritis)×100%%Recovery=(Konsentrasi TeoritisKonsentrasi Terukur)×100%
Contoh:
- Teoritis: 10 µg/mL
- Terukur: 9.8 µg/mL
- % Recovery = 98% (kriteria: 98–102%).
b. RSD (Presisi)
RSD=(SDmean)×100%RSD=(meanSD)×100%
Data:
- Hasil pengukuran (µg/mL): 9.8, 9.9, 10.1, 10.0, 9.9
- Mean = 9.94, SD = 0.114
- RSD = 1.15% (memenuhi syarat ICH).
Kesimpulan
Spectrophotometer UH5300 adalah alat esensial dalam farmasi untuk:
✔ Kontrol kualitas rutin (uji kadar obat).
✔ Pengembangan formulasi (disolusi, stabilitas).
✔ Kepatuhan regulasi (validasi metode ICH Q2).
Dengan protokol yang tepat dan kalibrasi rutin, UH5300 memberikan data yang akurat, presisi, dan reprodusibel.